當前位置：首頁 > 技術文章 > genetargetsolutions電動大腸桿菌

genetargetsolutions電動大腸桿菌

更新時間：2019-12-27 點擊次數：1723

genetargetsolutions電動大腸桿菌

TransforMax™EPI300™電動大腸桿菌

應用領域

使用CopyControl™克隆系統生成可誘導的拷貝數克隆。

TransforMax™EPI300™ 大腸桿菌 細胞缺少 tonA 基因，經過改造可與Epicentre的CopyControl™cDNA，基因和PCR克隆試劑盒以及其他不需要噬菌體T1抗性細胞的CopyControl克隆系統一起使用。細胞包含可誘導的突變體 trfA 基因，其基因產物是從ori V 復制起點開始復制所必需的，例如在CopyControl pCC1™載體中。在LB氯霉素平板上或在補充氯霉素的LB或SOC培養基中，在TransforMax EPI300 大腸桿菌中生長的CopyControl克隆從F因子復制子以單拷貝數復制，因為trfA的表達基因被抑制。加入CopyControl誘導溶液可誘導細胞表達 trfA 基因產物，并誘導其從ori V 以高拷貝數復制（圖1）。從ori V 復制可產生更高的產量和更高的克隆DNA純度。好處

克隆的拷貝數受到與trfA 基因連接的誘導型啟動子的嚴格控制。
具有各種大小的克隆的高轉化效率。
lacZΔM15 用于重組體的藍/白篩選。
限制-負[ mcrA，Δ（mrr-hsdRMS-mcrBC）]表型能夠有效克隆甲基化DNA。
核酸內切酶負號（endA1），以確保高產量的DNA。
重組減號（recA1），用于較大插入片段克隆的更高穩定性。

基因型

F- mcrAΔ（mrr-hsdRMS-mcrBC）Φ80dlacZΔM15ΔlacX74recA1 endA1 araD139Δ（ara，leu）7697 galU galKλ-rpsL（StrR）nupG trfA dhfr

TransforMax EPI300電 感受態大腸桿菌

pUC19的轉化效率> 1 x 1010 cfu / µg。

TransforMax EPI300具有化學活性的 大腸桿菌

pUC19的轉化效率> 5 x 108 cfu / µg。

圖1.在TransforMax™EPI300™ 大腸桿菌中， 可以將CopyControl™BAC克隆的拷貝數誘導10到20倍 。加入CopyControl誘導溶液后，來自CopyControl BAC克隆的110-145 kb BAC DNA的產量增加了14倍以上。U =未誘導的細胞；I ＝誘導的細胞。